Resistenza agli acidi - Acid-fastness
La resistenza agli acidi è una proprietà fisica di alcune cellule batteriche ed eucariotiche , nonché di alcune strutture subcellulari, in particolare la loro resistenza alla decolorazione da parte degli acidi durante le procedure di colorazione di laboratorio . Una volta colorati come parte di un campione, questi organismi possono resistere alle procedure di decolorazione a base di acido e/o etanolo comuni in molti protocolli di colorazione, da cui il nome acido- resistente .
I meccanismi di resistenza all'acido variano a seconda della specie, sebbene l'esempio più noto sia nel genere Mycobacterium , che comprende le specie responsabili della tubercolosi e della lebbra. La resistenza all'acido dei micobatteri è dovuta all'elevato contenuto di acido micolico delle loro pareti cellulari , responsabile del pattern di colorazione di scarso assorbimento seguito da elevata ritenzione. Alcuni batteri possono anche essere parzialmente acido-resistenti, come Nocardia .
Gli organismi acido-resistenti sono difficili da caratterizzare utilizzando tecniche microbiologiche standard, sebbene possano essere colorati utilizzando coloranti concentrati, in particolare quando il processo di colorazione è combinato con il calore. Alcuni, come i micobatteri , possono essere colorati con la colorazione di Gram , ma non assorbono bene il cristalvioletto e quindi appaiono viola chiaro, il che può ancora potenzialmente comportare un'identificazione gram negativa errata.
La tecnica di colorazione più comune utilizzata per identificare i batteri acido-resistenti è la colorazione Ziehl-Neelsen , in cui le specie acido-resistenti sono colorate di rosso vivo e risaltano chiaramente su uno sfondo blu. Un altro metodo è il metodo Kinyoun , in cui i batteri sono colorati di rosso vivo e risaltano chiaramente su uno sfondo verde. I micobatteri acido- resistenti possono essere visualizzati anche mediante microscopia a fluorescenza utilizzando specifici coloranti fluorescenti ( colorazione auramina-rodamina , ad esempio). Le uova del trematode polmonare parassita Paragonimus westermani vengono effettivamente distrutte dalla macchia, il che può ostacolare la diagnosi nei pazienti che presentano sintomi simili alla tubercolosi.
Alcune tecniche di colorazione acido-resistenti
- Ziehl–Neelsen (tipi di candeggina classici e modificati)
- Kinyoun macchia
- Per le persone daltoniche (o in sfondi in cui è difficile rilevare i batteri rossi), il blu Victoria può essere sostituito dalla carbolfucsina e l'acido picrico può essere usato come contromacchia invece del blu di metilene e può essere utilizzato il resto della tecnica Kinyoun.
- Varie tecniche di colorazione delle spore batteriche che utilizzano Kenyon, ad es
- Metodo di Moeller
- Metodo di Dorner (decolorante acido alcolico) senza la modifica Schaeffer-Fulton (decolorare con acqua)
- Metodo detergente, utilizzando Tergitol 7, tensioattivi non ionici poliglicoletere tipo NP-7
- Varie tecniche di colorazione delle spore batteriche che utilizzano Kenyon, ad es
- Macchia fitta
- Colorazione Ellis e Zabrowarny (senza fenolo/acido carbolico)
- Colorazione auramina-rodamina
- Colorante auramina fenolo
Strutture acido-resistenti notevoli
Pochissime strutture sono acido-resistenti; questo rende la colorazione per la resistenza all'acido particolarmente utile nella diagnosi. I seguenti sono esempi notevoli di strutture che sono acido-resistenti o modificate acido-resistenti:
- Tutti i micobatteri - M. tuberculosis , M. leprae , M. smegmatis e Mycobacterium atipico
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Actinomiceti (soprattutto alcuni aerobi) con acido micolico nella loro parete cellulare (nota che gli Streptomyces NON hanno); da non confondere con Actinomyces , che è un genere non acido- resistente di actinomicete
- Nocardia (debolmente acido-resistente; resiste alla decolorazione con concentrazioni di acido più deboli)
- rodococco
- Gordonia (un actinomicete)
- Tsukamurella
- Dietzia
- Testa di sperma
- Spore batteriche, vedi Endospore
- Legionella micdadei
- Alcune inclusioni cellulari, ad es
- Corpi di inclusione citoplasmatici visti in
- Neuroni nello strato 5 della corteccia cerebrale ceroide lipofuscinosi neuronale ( malattia di Batten ).
- Corpi di inclusione nucleare visti in
- Avvelenamento da piombo
- Avvelenamento da bismuto.
- Corpi di inclusione citoplasmatici visti in
- Oocisti di alcuni coccidi parassiti nella materia fecale, come:
- Alcuni altri parassiti:
- sarcocisti
- Le uova di Taenia saginata si colorano bene ma leuova di Taenia solium no (può essere usato per distinguere)
- Le cisti idatidee , in particolare i loro " uncini " si colorano irregolarmente con la colorazione ZN ma emanano una fluorescenza rossa brillante sotto la luce verde e possono aiutare il rilevamento in sfondi moderatamente pesanti o con scarsi uncini.
- Le forme di lievito fungino sono colorate in modo incoerente con la colorazione acido-resistente che è considerata una macchia a spettro ristretto per i funghi. In uno studio sulla resistenza all'acido dei funghi, il 60% dei blastomice e il 47% dell'istoplasma hanno mostrato una colorazione citoplasmatica positiva delle cellule simili al lievito, e Cryptococcus o candida non si sono colorati, e una colorazione molto rara è stata osservata nelle endospore di Coccidioides.
Riferimenti
Esempi di protocolli online
- Protocollo Ziehl–Neelsen ( formato PDF ).
- Metodo alternativo Ellis & Zabrowarny Archiviato il 04/01/2006 presso la Wayback Machine per la colorazione dell'AFB.