Microscopia in campo chiaro - Bright-field microscopy

Un esempio di micrografia in campo chiaro . Questa immagine mostra una sezione trasversale del tessuto vascolare in un gambo di pianta.

La microscopia in campo chiaro (BF) è la più semplice di tutte le tecniche di illuminazione della microscopia ottica . L'illuminazione del campione è trasmessa (cioè illuminata dal basso e osservata dall'alto) luce bianca e il contrasto nel campione è causato dall'attenuazione della luce trasmessa nelle aree dense del campione. La microscopia in campo chiaro è la più semplice di una gamma di tecniche utilizzate per l'illuminazione di campioni nei microscopi ottici e la sua semplicità la rende una tecnica popolare. L'aspetto tipico di un'immagine al microscopio in campo chiaro è un campione scuro su uno sfondo chiaro, da cui il nome.

Percorso luminoso

Il percorso della luce di un microscopio a campo chiaro è estremamente semplice, non sono necessari componenti aggiuntivi oltre alla normale configurazione del microscopio ottico. Il percorso della luce è quindi composto da:

  • una sorgente luminosa per transilluminazione, comunemente una lampada alogena nel supporto del microscopio;
  • una lente condensatrice , che focalizza la luce dalla sorgente luminosa sul campione;
  • una lente obiettiva , che raccoglie la luce dal campione e ingrandisce l'immagine;
  • oculari e/o una fotocamera per visualizzare l'immagine campione.

La microscopia in campo chiaro può utilizzare l' illuminazione critica o Köhler per illuminare il campione.

Prestazione

La microscopia in campo chiaro ha tipicamente un basso contrasto con la maggior parte dei campioni biologici, poiché pochi assorbono la luce in larga misura. La colorazione è spesso necessaria per aumentare il contrasto, il che impedisce l'uso su cellule vive in molte situazioni. L'illuminazione a campo chiaro è utile per i campioni che hanno un colore intrinseco, ad esempio i cloroplasti nelle cellule vegetali.

La microscopia in campo chiaro è una tecnica di microscopia ottica standard e quindi l' ingrandimento è limitato dal potere di risoluzione possibile con la lunghezza d' onda della luce visibile .

Vantaggi

  • Semplicità di installazione con solo l'attrezzatura di base richiesta.
  • Le cellule viventi possono essere viste con microscopi a campo chiaro.

Limitazioni

  • Contrasto molto basso della maggior parte dei campioni biologici.
  • Il limite pratico all'ingrandimento con un microscopio ottico è di circa 1300X. Sebbene siano possibili ingrandimenti maggiori, diventa sempre più difficile mantenere la nitidezza dell'immagine all'aumentare dell'ingrandimento.
  • Bassa risoluzione ottica apparente a causa della sfocatura del materiale fuori fuoco.
  • I campioni che sono naturalmente incolori e trasparenti non possono essere visti bene, ad esempio molti tipi di cellule di mammifero. Questi campioni devono spesso essere colorati prima della visualizzazione. I campioni che hanno il proprio colore possono essere visti senza preparazione, ad esempio l'osservazione del flusso citoplasmatico nelle cellule di Chara .

Miglioramenti

  • Riducendo o aumentando la quantità della sorgente luminosa tramite il diaframma ad iride .
  • Utilizzo di una lente obiettivo ad immersione in olio e di uno speciale olio per immersione posto su un coperchio di vetro sopra il campione. L'olio da immersione ha la stessa rifrazione del vetro e migliora la risoluzione del campione osservato.
  • Uso di metodi di colorazione del campione per l'uso in microbiologia , come le colorazioni semplici ( blu di metilene , safranina , cristalvioletto ) e le colorazioni differenziali (macchie negative, colorazioni flagellari, colorazioni endospore).
  • Utilizzo di un filtro colorato (di solito blu) o polarizzante sulla sorgente luminosa per evidenziare le caratteristiche non visibili sotto la luce bianca. L'uso di filtri è particolarmente utile con campioni di minerali .

Riferimenti

  1. Microscopia ottica avanzata vol. 1 Principi e proprietà di base di Maksymilian Pluta, Elsevier (1988)
  2. Microscopia ottica avanzata vol. 2 metodi specializzati di Maksymilian Pluta, Elsevier (1989)
  3. Introduzione alla microscopia ottica di S. Bradbury, B. Bracegirdle, BIOS Scientific Publishers (1998)
  4. Microbiologia: principi ed esplorazioni di Jacquelyn G. Black, John Wiley & Sons, Inc. (2005)
  5. Letteratura di microscopia e imaging
Appunti
  1. ^ Alberts, Bruce; et al. (2002). Biologia molecolare della cellula (4a ed.). New York: scienza della ghirlanda. ISBN 0-8153-3218-1.
  2. ^ "Microscopia: tipi di microscopia" (PDF) . Istituto universitario della Comunità di Hillsborough . Estratto il 19 aprile 2017 .