H&E macchia - H&E stain

Retina (parte dell'occhio ) colorata con ematossilina ed eosina , nuclei cellulari colorati di blu-viola e materiale extracellulare colorato di rosa.

Ematossilina ed eosina ( o ematossilina ed eosina o ematossilina-eosina , spesso abbreviata come colorazione con ematossilina eosina o HE macchia ) è uno dei principali tessuti macchie utilizzati in istologia . È la macchia più utilizzata nella diagnosi medica ed è spesso il gold standard . Ad esempio, quando un patologo esamina una biopsia di un sospetto cancro , è probabile che la sezione istologica sia colorata con H&E.

H&E è la combinazione di due colorazioni istologiche: ematossilina ed eosina . L'ematossilina colora i nuclei cellulari di un blu violaceo e l'eosina colora la matrice extracellulare e il citoplasma di rosa, con altre strutture che assumono diverse sfumature, tonalità e combinazioni di questi colori. Quindi un patologo può facilmente distinguere tra le parti nucleari e citoplasmatiche di una cellula e, inoltre, i modelli complessivi di colorazione della macchia mostrano la disposizione e la distribuzione generali delle cellule e forniscono una panoramica generale della struttura di un campione di tessuto. Pertanto, il riconoscimento di pattern, sia da parte di esseri umani esperti stessi che da software che aiuta tali esperti (in patologia digitale ), fornisce informazioni istologiche.

Questa combinazione di macchie è stata introdotta per la prima volta nel 1876 da A. Wissowzky.

Usi

La procedura di colorazione H&E è la colorazione principale in istologia in parte perché può essere eseguita rapidamente, non è costosa e colora i tessuti in modo tale da rivelare una notevole quantità di anatomia microscopica e può essere utilizzata per diagnosticare un'ampia gamma di condizioni istopatologiche . I risultati della colorazione H&E non dipendono eccessivamente dalla sostanza chimica utilizzata per fissare il tessuto o da lievi incongruenze nel protocollo di laboratorio e questi fattori contribuiscono al suo uso di routine nell'istologia.

La colorazione H&E non sempre fornisce un contrasto sufficiente per differenziare tutti i tessuti, le strutture cellulari o la distribuzione delle sostanze chimiche, e in questi casi vengono utilizzate colorazioni e metodi più specifici.

Metodo di applicazione

Rack di vetrini da rimuovere da un bagno di colorazione con ematossilina.

Esistono molti modi per preparare le soluzioni di ematossilina (formulazione) utilizzate nella procedura H&E, inoltre, ci sono molti protocolli di laboratorio per la produzione di vetrini colorati con H&E, alcuni dei quali possono essere specifici per un determinato laboratorio. Sebbene non esista una procedura standard, i risultati per convenzione sono ragionevolmente coerenti in quanto i nuclei cellulari sono colorati in blu e il citoplasma e la matrice extracellulare sono colorati in rosa. I laboratori di istologia possono anche regolare la quantità o il tipo di colorazione per un particolare patologo.

Dopo che i tessuti sono stati raccolti (spesso come biopsie ) e fissati, vengono tipicamente disidratati e incorporati in cera di paraffina fusa , il blocco risultante viene montato su un microtomo e tagliato a fette sottili. Le fette vengono fissate su vetrini da microscopio, a quel punto la cera viene rimossa con un solvente e le fette di tessuto attaccate ai vetrini vengono reidratate e sono pronte per la colorazione. In alternativa, la colorazione H&E è la colorazione più utilizzata nella chirurgia di Mohs in cui i tessuti sono tipicamente congelati, tagliati su un criostato (un microtomo che taglia il tessuto congelato), fissati in alcool e quindi colorati.

Il metodo di colorazione H&E prevede l'applicazione di ematossilina miscelata con un sale metallico, o mordente , spesso seguita da un risciacquo in una soluzione acida debole per rimuovere la colorazione in eccesso ( differenziazione ), seguita da azzurramento in acqua leggermente alcalina . Dopo l'applicazione di ematossilina, il tessuto viene controcolorato con eosina (più comunemente eosina Y ).

Risultati

Ematossilina principalmente colori i nuclei di cellule blu o scuro-viola, insieme ad alcuni altri tessuti, come keratohyalin granuli e calcificata materiale. L'eosina colora il citoplasma e alcune altre strutture compresa la matrice extracellulare come il collagene fino a cinque tonalità di rosa. Le strutture eosinofile (sostanze che vengono colorate dall'eosina) sono generalmente composte da proteine intracellulari o extracellulari . I corpi di Lewy e i corpi di Mallory sono esempi di strutture eosinofile. La maggior parte del citoplasma è eosinofila ed è resa rosa. I globuli rossi sono colorati di rosso intenso.

Modo di agire

Sebbene l' emateina , una forma ossidata di ematossilina, sia il colorante attivo (se combinato con un mordente), la macchia è ancora indicata come ematossilina . L'ematossilina, quando combinata con un mordente (più comunemente allume di alluminio ) è spesso considerata "assomigliare" a una macchia basica, carica positivamente o cationica . L'eosina è una macchia anionica (con carica negativa) e acida. La colorazione dei nuclei mediante emalio (una combinazione di ioni alluminio ed emateina) è normalmente dovuta al legame del complesso colorante-metallo al DNA, ma la colorazione nucleare può essere ottenuta dopo l'estrazione del DNA da sezioni di tessuto. Il meccanismo è diverso da quello della colorazione nucleare con coloranti basici (cationici) come la tionina o il blu di toluidina . La colorazione con coloranti basici si verifica solo da soluzioni meno acide dell'emal, ed è prevenuta mediante una precedente estrazione chimica o enzimatica degli acidi nucleici. Ci sono prove che indicano che i legami coordinati, simili a quelli che tengono insieme l'alluminio e l'emateina, legano il complesso dell'emal al DNA e ai gruppi carbossilici di proteine ​​nella cromatina nucleare .

Le strutture non devono essere acide o basiche per essere chiamate basofile ed eosinofile; la terminologia si basa sull'affinità dei componenti cellulari per i coloranti. Altri colori, ad esempio giallo e marrone, possono essere presenti nel campione; sono causati da pigmenti intrinseci come la melanina . Le lamine basali devono essere colorate con PAS o con alcune macchie d'argento , se devono essere ben visibili. Le fibre reticolari richiedono anche la macchia d'argento. Anche le strutture idrofobe tendono a rimanere chiare; questi sono solitamente ricchi di grassi, ad esempio adipociti , mielina attorno agli assoni dei neuroni e membrane dell'apparato del Golgi .

Esempi di tessuti colorati con H&E

Riferimenti

Ulteriori letture

  • Kiernan JA (2008) Metodi istologici e istochimici: teoria e pratica. 4a ed. Bloxham, Regno Unito: Scion.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Macchie nucleari con coloranti lacca mordenti metacromi solubili. L'effetto delle reazioni chimiche di blocco dei gruppi terminali e l'introduzione artificiale di gruppi acidi nei tessuti. Istochimica 49: 23-35.
  • Llewellyn BD (2009) Colorazione nucleare con allume-ematossilina. Biotecnologia. istochimica. 84: 159-177.
  • Puchtler H, Meloan SN, Waldrop FS (1986) Applicazione degli attuali concetti chimici alle macchie di metallo-emateina e -brazileina. Istochimica 85: 353-364.

link esterno

Protocollo