DNA laddering - DNA laddering
Frammentazione del DNA è una caratteristica che può essere osservata quando DNA frammenti, derivanti da apoptotico frammentazione del DNA , sono visualizzate dopo separazione mediante elettroforesi su gel . E 'stato descritto nel 1980 da Andrew Wyllie presso l' Università di Edimburgo Medical School . Frammenti di DNA possono essere rilevati anche nelle cellule che hanno subito necrosi, ma quando questi frammenti di DNA dopo la separazione vengono sottoposti ad elettroforesi su gel no "scaletta" modello chiaro è evidente.
Contenuto
degradazione del DNA
Frammentazione del DNA è una caratteristica distintiva del DNA degradato da caspasi-attivato DNasi (CAD), che è un evento chiave durante l'apoptosi . Scinde CAD DNA genomico in linker internucleosomal regioni, con conseguente frammenti di DNA che sono multipli di 180-185 coppie di basi di lunghezza. Separazione dei frammenti di elettroforesi su gel di agarosio e successiva visualizzazione, ad esempio etidio bromuro colorazione, determina un caratteristico pattern "scaletta". Un semplice metodo di estrazione selettiva del DNA frammentato da cellule apoptotiche senza la presenza di sezioni DNA ad alto peso molecolare, generando il modello laddering, utilizza pretrattamento di cellule in etanolo .
L'apoptosi e necrosi
Mentre la maggior parte delle morfologiche caratteristiche delle cellule apoptotiche sono di breve durata, frammentazione del DNA può essere utilizzato come stato finale metodo di lettura ed è quindi diventata un metodo affidabile per distinguere l'apoptosi dalla necrosi . Frammentazione del DNA può essere utilizzato anche per vedere se le cellule sono stati sottoposti apoptosi in presenza di un virus. Questo è utile perché può aiutare a determinare gli effetti di un virus ha su una cella.
frammentazione del DNA può essere utilizzato solo per rilevare apoptosi durante le fasi successive di apoptosi. Ciò è dovuto alla frammentazione del DNA che avviene in una fase successiva del processo di apoptosi. frammentazione del DNA viene utilizzato per verificare l'apoptosi di molte cellule, e non è preciso a test per solo poche cellule che hanno commesso l'apoptosi. Per migliorare la precisione nei test per l'apoptosi, altri saggi sono utilizzati insieme con il DNA laddering quali TEM e TUNEL. Con i recenti miglioramenti frammentazione del DNA, DNA laddering è diventata una tecnica più affidabile e ragionevole utilizzare quando rilevano apoptosi. E 'anche importante notare che frammentazione del DNA avviene in maniera differente a seconda del tipo di cellula, così ci possono essere leggere modifiche nel processo di frammentazione del DNA seconda cella che è indagato.
Guarda anche
Riferimenti
ulteriore lettura
Yeung, MC (2002). "Accelerated DNA apoptotica protocollo laddering". BioTechniques . 33 (4): 734, 736. PMID 12.398.177 .